В настоящем исследовании изучено влияние процедур прослушивания акустического образа собственной ЭЭГ в реальном времени на фагоцитоз стафилококка гранулоцитами здоровых людей. Показано, что данные процедуры прослушивания акустического образа собственной ЭЭГ усиливают дезинтеграцию бактерий фагоцитами человека.
Функциональное состояние центральной нервной системы (ЦНС) оказывает значительное влияние на уровень неспецифической резистентности организма. Снижение функционального состояния ЦНС и, как следствие, подавление процессов саморегуляции, приводит к ослаблению естественной сопротивляемости организма, что, в свою очередь, способствует развитию различных инфекционных заболеваний. Ранее сообщалось о разработке нефармакологического способа активации процессов саморегуляции функционального состояния ЦНС на основе метода биоакустической коррекции (БАК).
В методе БАК коррекция состояния достигается процедурами прослушивания звукового образа собственной биоэлектрической активности головного мозга, который создается на основе компьютерного транспонирования спектра текущей электроэнцефалограммы в область частот акустического диапазона. Показано, что данный метод способен влиять на психофизиологические и психологические показатели человека, способствуя восстановлению функционального состояния ЦНС. Действие биоакустической коррекции на иммунную систему ранее не изучалось.
Целью настоящей работы явилось исследование влияния метода биоакустической коррекции на один из наиболее важных показателей неспецифической резистентности – фагоцитарную активность гранулоцитов с акцентом на способность фагоцитов дезинтегрировать микробные клетки.
Методика исследования
Обследовано 17 практически здоровых волонтеров: 13 мужчин (в возрасте 22-60 лет), 4 женщины (в возрасте 22-57 лет). Все волонтеры прошли курс процедур БАК. Процедуры БАК проводились на основе компьютерного комплекса Синхро-С. Процедуры заключались в прослушивании больными акустического образа собственной ЭЭГ в реальном времени. Регистрация ЭЭГ проводилась по 4 каналам в точках Fp1, Fp2, O1, O2, с частотой дискретизации 250 Гц, униполярно относительно объединенных ушных электродов. Акустический образ создавали на основе регистрируемой ЭЭГ путем транспонирования ее на компьютере в область слышимых частот и в реальном времени предъявляли испытуемому. Курс процедур БАК состоял из 5-ти сеансов, длительность каждого сеанса 30 минут.
До и через различные временные интервалы (15, 60, 90 суток) после проведения курса процедур БАК изучали фагоцитарную активность гранулоцитов периферической крови. Для этого гепаринизированную кровь обогащали лейкоцитами путем центрифугирования при 800 об/мин в течение 5-ти минут с помощью 0,2 % водного раствора трипанового голубого (Sigma), и оценивали жизнеспособность клеток, которая обычно составляла 97-98 %. Затем к взвеси лейкоцитов добавляли микробные клетки суточной культуры St. Albus, штамм 9198, в конечной концентрации 2,5х107 бактерий в 1,0 мл.
Лейкоцитарно-микробную взвесь инкубировали при 37°С в течение 45 минут при постоянном встряхивании и распределяли в чашке Петри в виде двух мазков на поверхности 1,8% мясопептонного агара. Готовили препарат-отпечаток, а чашку с оставшимся мазком для контрольной оценки способности бактерий к росту и размножению выдерживали 3 часа в термостате при 37°С и готовили второй препарат-отпечаток. В препаратах-отпечатках, окрашенных по Романовскому-Гимза, живые и погибшие стафилококки четко различались: погибшие микробные клетки окрашивались в розовый, а живые — в темно-фиолетовый цвет.
В каждом препарате-отпечатке подсчитывали 900-1000 гранулоцитов. Определяли: фагоцитарный показатель — процент лейкоцитов, участвующих в фагоцитозе; фагоцитарное число — среднее арифметическое количество микробных клеток в одном фагоците и показатель завершенного фагоцитоза — отношение в процентах количества лейкоцитов с явлениями завершенного фагоцитоза к общему числу лейкоцитов с фагоцитарными микробами [1]. Контролем служили показатели фагоцитарной активности гранулоцитов до воздействия биоакустической коррекции.
Результаты исследования и обсуждение
На основании оценки степени завершенности фагоцитоза в контроле (до проведения БАК) волонтеров условно делили на 3 группы: 1) с высоким показателем завершенного фагоцитоза — 38,8±1,4% до и 71,3±1,3% после 3-х часового подращивания лейкоцитарно-микробной взвеси на агаре (табл. 1); 2) с низким показателем — 25,2±1,4% до и 44,5±1,6% после подращивания взвеси табл. 2); 3) с очень низким показателем — 12, 1±1,1 % до и 20,3±1,3% после подращивания взвеси (табл. 3).
После проведения БАК высокий показатель завершенного фагоцитоза у испытуемых 1-й группы по сравнению с контролем снижался до подращивания взвеси и не менялся после этого. Снижение фагоцитарного показателя и фагоцитарного числа под воздействием БАК, наблюдалось лишь после подращивания лейкоцитарно-микробной взвеси (табл. 1). У одного из волонтеров также с высоким показателем завершенного фагоцитоза в контроле (43,0±2,2% до и 62,5±1,3% после подращивания) курс БАК сопровождался снижением показателя до значений 29,3±1,8% и 17,5±1,7% соответственно, p<0,01. При этом, снижение фагоцитарного показателя наблюдалось только после подращивания лейкоцитарно-микробной взвеси и составило 31,3±2,2% против 44,7±2,0% в контроле, p<0,05. Фагоцитарное число не менялось: 3,5±0,09 в опыте и 3,4±0,08 в контроле (данные в таблицах не показаны).
В группах волонтеров с низким и очень низким показателем завершенного фагоцитоза в контроле под влиянием БАК наблюдался выраженный рост показателя как до, так и после подращивания лейкоцитарно-микробной взвеси (табл. 2 и 3). У волонтеров с исходно низкими значениями показателя в контроле повышение его значений сохранялось в течение 90 суток. При этом после подращивания взвеси наблюдалось снижение фагоцитарного показателя и фагоцитарного числа (табл. 2).
У волонтеров с очень низким показателем завершенного фагоцитоза в контроле повышение дезинтегрирующей активности гранулоцитов наблюдалось в течение 60 суток. Спустя 60-90 суток наблюдалось снижение показателя завершенного фагоцитоза с одновременным увеличением фагоцитарного числа (табл. 3). Эти процессы сопровождались разрастанием микробных клеток вне лейкоцитов. Наблюдаемые явления не зависели от пола и возраста.
Представленные данные показывают, что при высоком уровне показателя завершенного фагоцитоза у испытуемых процедуры биоакустической коррекции не влияют, а при низком – усиливают способность гранулоцитов дезинтегрировать микробные клетки. Дезинтеграция микробных клеток, как ранее уже было показано [1], является наиболее информативным показателем завершенности фагоцитарного процесса. Фагоцитарный показатель и фагоцитарное число не всегда коррелируют со степенью дезинтеграции фагоцитами микробных клеток. Более того, большие величины этих показателей могут свидетельствовать о низкой дезинтегрирующей способности гранулоцитов.
Это положение подтверждается результатами настоящего исследования. Так при фагоцитарном показателе 68,9±1,5% и фагоцитарном числе 12,5±0,12% показатель завершенного фагоцитоза составляет всего 29,7±1,4% (табл. 3), в то время как при значительно более низких величинах фагоцитарного показателя и фагоцитарного числа (35,0±1,3% и 2,6±0,09%, соответственно), показатель завершенного фагоцитоза достигает 75,0±1,5% (табл. 2).
Очень низкий уровень завершенного фагоцитоза в контроле (12,1±1,1%, табл. 3) является отражением выраженного подавления реакций неспецифической резистентности, вызванного действием эндогенных и экзогенных факторов. Повреждающее действие этих факторов блокируется процедурами БАК, которые усиливают способность гранулоцитов дезинтегрировать микробные клетки, однако следует отметить, что через 1 месяц показатель завершенного фагоцитоза у данных волонтеров снижается до 16,6±0,8% (табл. 3), но к 90 суткам показатели фагоцитарной активности в целом остаются выше исходного уровня. В то же время способность БАК в условиях низких показателя завершенного фагоцитоза значительно усиливать дезинтеграцию микробных клеток позволяет рекомендовать этот метод для активации факторов неспецифической противомикробной резистентности, основным из которых является фагоцитоз.
Авторы: К.В. Константинов, Д.Б.Мирошников, В.Н. Трушина, О.Я. Попова, В.М. Клименко.